利用PCR技术从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)中扩增出3.5 kb的核黄素操纵子,将其分别连接到不同拷贝数的表达载体pSC101、p15A、pBR322,得到重组载体pSC 101-BSrib、p15A-BSrib和pBR322-BSrib,并分别转化到大肠杆菌(Escherichia coli K-12 MG1655).对含有核黄素操纵子的重组大肠杆菌进行摇瓶发酵,结果表明其核黄素合成能力随着质粒拷贝数的增加而增强.随后对E.coli K-12 MG1655 ECX3菌株的诱导剂IPTG浓度和发酵温度进行了优化.结果显示,0.1 mmol· L-IPTG和42℃为核黄素生产的最适宜条件.在此条件下,菌株ECX3在LB培养基中核黄素产量达到251.4 mg·L-1.最后,通过无痕基因操作技术,减弱了工程菌株ECX3核黄素激酶/黄素腺嘌呤二核苷酸氨酰转移酶(ribF)的表达以减少核黄素转化为FMN和FAD,摇瓶中工程菌株ECX4的核黄素产量提高到292.3 mg·L-1.

徐志博

大肠杆菌中核黄素的生物合成途径改造及生产

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